다중 유전자 증폭 기술을 이용한 자연살해세포수용체 유전형 동정 방법
본 발명은 사람의 자연 살해 세포의 면역 글로불린 유사 수용체 (Killer cell immunoglubulin-like receptor, 이하 KIR) 의 유전형을 동정하는 방법에 관한 것이다. KIR 는 자연살해세포 (Natural Killer cell)과 신호전달을 통해 자연살해세포의 역할을 억제하고, 이들이 건강한 세포를 공격하지 못하도록 하는 역학을 수행한다. KIR 는 HLA(Human Leukocyte antigen)과 상호작용을 통해 자가 세포를 인식하며, 매우 복잡한 조합으로 이루어져 있다. KIR 는 19번 염색체의 Leukocyte receptor complex(LRC)의 100~200 kb 부위에 위치하며, 총 15개의 참 유전자 (True gene)과 2개의 유사유전자(Pseudo gene)으로 구성되어 있다. 이러한 복잡한 구조 및 특성을 가지는 KIR는 이를 분석하여 골수 이식, 장기 이식 시에 자가 면역 반응의 발생을 기존에 수행하던 HLA 타입만을 보던 것과 같이 이러한 KIR 유전형을 확인함에 따라 미리 어느정도 정확한 예측이 가능하다는 점, 미비하지만, 암관련 질환의 유전적 전이와의 관련성을 통해 질환의 가능성을 통찰하고 미리 발병의 예측을 할 수 있다는 점들이 최근 발표되면서, KIR 유전형 분석의 중요성이 더욱더 강조되고 있다.
본 방법은 모든 KIR 타입에 공통적인 서열을 선행 특허 기술인 TotalPlexTM 다중유전자 증폭 방법을 이용하여 다수의 서로다른 KIR 주형 유전자를 동시에 증폭해 내었고, 이후 이를 이용하여 각각 KIR 타입의 특이적인 서열을 찾아내고, 이곳에 특이반응이 가능한 선택프라이머와 바이오틴이 표지된 핵산의 중합반응을 통해 특정 KIR 유전형의 존재 유무, 혹은 증폭 유무를 확인할 수 있도록 고안하였다. 최종적으로는 이러한 프로브의 반응 여부를 비드 어레이를 이용한 분석법을 이용하여 피검체의 KIR 유전형을 동정할 수 있었다.
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